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借卵生子的费用地下_【上海液质检测】-植物组织中糖、淀粉和纤维素含量的测
来源:http://www.czlongteng.cn  日期:2022-12-02

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一、原理:

在植物组织中

还原糖

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、蔗糖等。

80%乙醇溶液,而淀粉和大部分蛋白质沉淀。

高氯酸

(HCIO4)溶解淀粉、蛋白质、纤维素等后。也可以沉淀。在用0.1摩尔-1氢氧化钠、热水和丙酮溶解蛋白质以除去果胶和脂类后,剩余的沉淀物可用于测定纤维素含量。将上述部分分离后,选择合适的方法分别进行测量。

本实验采用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖,洋葱酮法测定还原糖。

可溶性总糖

、淀粉和

纤维素

内容。原理如下

1.还原糖的测定:在碱性条件下,各种单糖、麦芽糖等还原糖与3,5-二硝基水杨酸试剂加热时,可将黄色的3,5-二硝基水杨酸还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内,还原糖的量与反应溶液的颜色成正比。用分光光度计在540nm波长处测量反应溶液的吸光度,通过检查标准曲线或使用一元回归方程计算还原糖的含量。

2.蒽酮比色法原理:糖(包括可溶性糖和多糖)在浓H2SO 4作用下脱水生成糠醛,然后一步脱水成环,生成糠醛衍生物,可与蒽酮脱水缩合生成蓝绿色物质。它在620 nm处有最大吸收,其色深在10~100 g范围内与糖含量成正比,该方法适用于己酮糖和醛糖的测定。

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加热时间和温度影响蒽酮反应的颜色深度,因此在操作中反应条件应一致。同时,当样品中含有较多的色氨酸时,反应不稳定。

二、仪器设备

三、试剂

1.80%乙醇溶液。

2.9.2摩尔-1

4.6摩尔-1

高氯酸

高氯酸铵.

3.0.1摩尔-1氢氧化钠溶液。

4.60%硫酸。

5.葡萄糖标准溶液:称取100mg分析纯葡萄糖(事先在80干燥至恒重),溶于蒸馏水中,定容至100mL,即为1mgmL -1。

标准储备溶液

,及时稀释10倍,也就是100gmL -1。

标准液体。

6.蒽酮-硫酸试剂:称取0.2g蒽酮和1.0g硫脲(抗氧化剂)于烧杯中,缓慢加入100mL浓硫酸,搅拌溶解,应为淡黄色透明溶液,可配合使用。

7.3,5-二硝基水杨酸试剂:准确称取1g 3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml 2mol-1 NaOH溶液中,加入50mL蒸馏水,然后加入30g酒石酸钾钠,溶解后用蒸馏水定容至100mL。关闭瓶塞以防止二氧化碳

进入。如果溶液浑浊,可以过滤后使用。

8.纤维素标准溶液:准确称取100mg纤维素,在冰浴中加入60~70mL预冷的60%H2SO4,在0 ~ 2水解12小时;然后使用60% H2SO4

稀释到

100mL刻度,摇匀。在冰浴中将该溶液稀释10倍,以获得100gmL -1。

标准液体。

四、材料

通过100目筛筛选的干燥植物样品或新鲜植物组织。

五、方法步骤

1.提取和分离

(1)称取0.5000克干燥植物样品于10毫升离心管中,加入5 ~ 6毫升80%乙醇溶液,80水浴30分钟,不时搅拌。用少量80%乙醇冲洗玻璃棒,将溶液冷却至室温,在3500g离心10分钟,将上清液转移至25mL容量瓶中;然后向沉淀物中加入5-6毫升80%的乙醇,如上所述重复提取两次,将上清液合并到25毫升容量瓶中,定容至刻度。提取液用于测定还原糖和可溶性糖。

(2)向沉淀物中加入2 mL蒸馏水,在沸水浴中糊化15 min,冷却,加入2 mL 9.2 molL -1HCIO,搅拌15 min,加入4mL蒸馏水,混匀,4000g离心10 min,将上清液转移至50 mL容量瓶中。然后向沉淀物中加入2ml 4.6moll-1 HCIO,搅拌提取15 min,加入5 mL蒸馏水,混匀,离心10min,合并上清液,用蒸馏水洗涤沉淀物两次,每次5~6mL,合并上清液,用蒸馏水定容至刻度。该提取物用于测定淀粉。沉淀用于纤维素的测定。

(3)用0.1摩尔-1氢氧化钠溶液洗涤沉淀,趁热干燥

提取两次,每次15分钟,合并上清液于25毫升容量瓶中,用60%H2SO4提取

将体积设置到用于测定粗纤维含量的刻度。

2.决心

(1)还原糖的测定

制作标准曲线:取7支带塞尺的25mL试管,按下表加入各种试剂。

加入试剂后摇匀,在沸水浴中加热5 min,取出后立即用流水冷却,加入蒸馏水定容至20 mL。1号管用作空白至零,在540 nm波长下进行比色测定。以吸光度为纵坐标,葡萄糖含量为横坐标,绘制或计算标准曲线。

样品中还原糖含量的测定:取2 mL可溶性糖提取液,置于10mL离心管中(每个样品重复3次),沸水浴蒸干,准确加入10-20ml蒸馏水(加水量视还原糖含量而定),充分搅拌使糖溶解,离心,取2mL上清液(剩余上清液用于测定可溶性糖)于试管中。

加入2ml 3,5-二硝基水杨酸试剂,用与标准曲线相同的方法测定。

结果计算

式中,C:由标准曲线求出或计算出的样品测量管中的葡萄糖含量(mg );v .样品提取物的总体积(mL);v:测量时的取样体积(mL );w:样品的干重(毫克)。

(2)

可溶性总糖的测定

制作标准曲线:取6支25mmX180mm试管,按下表加入各种试剂。

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除了蒽酮-H2SO4

试剂时间

最好把试管放在冰水浴中,沿着管壁慢慢加人,全部加完后再搅拌均匀。将上述标准管和样品管同时放入100水浴中,精确加热10 min,取出,用自来水冷却至室温,在620 nm波长处(光学直径0.5 cm)测量吸光度。以吸光度为纵坐标,糖液浓度为横坐标,绘制标准曲线。

样品测定:将上述还原糖测定的残留样品溶液适当稀释(10~50倍),然后取2mL,与标准管同样操作,记录620nm波长处的吸光度。

结果计算

式中,C:从标准曲线可查得样品测量管中葡萄糖的量(g );n:稀释倍数;1000:换算系数,1mg=1000g;其他符号意义与还原糖计算中的相同。

(3)淀粉含量的测定:将2 mL上述淀粉提取物放入25 mmX180 mm的试管中,并测定可溶性糖。结果计算如下。

其中,0.9:葡萄糖转化为淀粉的系数;其他符号与可溶性糖的符号相同。

(4)纤维含量的测定

蒽酮-H

2SO4

方法:根据下表加入各种试剂,制作标准曲线:

试剂加入上述标准管后,先不要摇匀,再吸取2 mL水解液(重复3次)放入另一个试管中。蒽酮硫酸试剂全部加入后,摇匀,操作同淀粉测定,按下式计算:

式中,C:从标准曲线上查得样品管中的纤维素含量(g );其他符号与可溶性糖的符号相同。

重量法:将脱脂后的沉淀物用丙酮洗涤两次,在105下干燥至恒重w],然后将称量好的粗纤维在马弗炉中于500下灼烧3 h,冷却后称量恒重(W2)。

式中,W:样品的干重(g);W1

W2:前后两个恒重(g)。

注意事项

1.测定新鲜样品时,用于提取可溶性总糖的乙醇浓度可根据物料的含水量换算后适当提高。

2.在测定可溶性糖(包括淀粉和纤维素)时,加入蒽酮-H2SO4。

试剂必须沿管壁缓慢带出,防止样品中的可溶性糖提前反应显色。

,影响实验结果。

3.所有样品测量管必须重复3次以上。

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参考资料